Nat. Biomed. Eng. ¦LbuCas13a直接靶向DNA并具有较强的反式切割活性

本文介绍了基于CRISPR-Cas系统的分子诊断技术CRISPR-Dx，特别是Cas13a作为一种RNA内切酶在RNA检测中的应用。针对单核苷酸多态性（SNP）鉴别灵敏度低的挑战，作者开发了基于LbuCas13a的靶标核酸检测平台SUREST。该平台结合重组酶聚合酶扩增（RPA）技术，利用LbuCas13a直接靶向DNA且不依赖PAM序列的特性，实现了对DNA靶标的高灵敏度检测。实验表明，LbuCas13a可直接靶向单链DNA并展现出强大的反式切割活性，且在单核苷酸特异性上优于RNA靶标。SUREST系统在人类细小病毒B19、人类乳头瘤病毒16和乙型肝炎病毒的检测中表现出极高的灵敏度和特异性，具有在病毒检测和临床诊断中广泛应用的潜力。