Angew. Chem. Int. Ed. | 基于活性的泛素探针捕获去泛素酶的次磺酸化修饰状态

本文研究背景是去泛素化酶（DUB）的活性依赖于其活性中心的低pKa半胱氨酸残基，该残基对氧化还原状态敏感，在细胞氧化应激响应中起关键调控作用。DUB催化半胱氨酸可被可逆氧化为次磺酸（─SOH），作为重要中间态可逆地抑制DUB活性，进而影响蛋白质运输、折叠、翻译及DNA修复等过程，在癌症和神经退行性疾病中具有病理意义。研究目的是开发一类新型基于活性的泛素探针（Ub-ABP），通过在泛素C端引入次磺酸反应弹头，实现在体外和细胞裂解物中选择性标记次磺酸化DUB。研究结论表明，Ub74-DYn-2探针对氧化态DUB标记效率最高，能有效检测内源性氧化态UCHL3，并在H₂O₂处理的HEK293T细胞裂解物中鉴定出13种显著富集的次磺酸化DUB和4种E3连接酶。该探针还能在线粒体应激模型中检测生理性内源ROS导致的DUB次磺酸化，为研究泛素系统的氧化还原调控提供了有效工具。