Anal. Chem./使用毫秒级氢氘交换质谱法重新校准保护因子

背景：氢氘交换质谱（HDX-MS）是研究蛋白质结构动态的重要工具，但传统方法难以实现绝对定量，其本征交换速率的计算依赖于一个假设完全无序的参考肽段（多聚-DL-丙氨酸，PDLA），而近年研究表明该参考存在偏差。研究目的：本研究旨在通过重新校准本征交换速率的计算基础，推动HDX-MS从定性比较技术转向提供绝对定量结构信息的分析方法。结论：通过毫秒级HDX-MS实验和分子动力学模拟，研究发现PDLA因具有残余螺旋结构而不适合作为完全无序参考，提出三丙氨酸肽（3-Ala）是更合适的参考标准；同时指出缓冲液盐浓度显著影响交换速率，必须纳入校准模型。这项工作为提升HDX-MS的定量精度和与计算方法的整合奠定了基础。