内源型CRISPR/Cas系统用于两种产乙酸菌的基因组工程

背景：伍氏醋酸杆菌是一种同型产乙酸菌，能将二氧化碳转化为化学品和燃料，但常用的化脓链球菌II型CRISPR/Cas9系统在其基因组编辑中未成功，可能因Cas9毒性或限制修饰系统识别位点问题。研究目的：利用伍氏醋酸杆菌内源I-B型CRISPR/Cas系统开发基因组编辑工具，避免依赖复杂诱导型启动子，并扩展至自产醇梭菌。结论：作者通过分析内源CRISPR阵列，筛选出PAM序列5'-CCA，构建编辑质粒，成功实现pyrE基因缺失和报告基因插入，优化同源臂长度和转化条件提高效率，并删除限制性亚基基因以改善质粒转化；在自产醇梭菌中应用同样方法，实现了高效pyrE基因编辑。