连佳长团队Chem & Bio Engineering|CRISPR介导的rDNA整合与荧光筛选的毕赤酵母多拷贝整合和途径优化

连佳长课题组在Chem & Bio Engineering上发表的研究论文，通过CRISPR介导的rDNA整合与荧光筛选技术，开发了一种高效的毕赤酵母多拷贝整合工具包，用于优化基因表达和途径效能。研究中，团队设计了CRISPOi和CRISPOc两种策略，分别用于香叶醇生物合成和甲羟戊酸（MVA）途径的限速步骤识别。实验结果显示，通过CRISPOi工具多拷贝整合香叶醇合酶，香叶醇产量提高了19.5倍；而CRISPOc策略成功识别并解除了MVA途径的瓶颈，确定了HMG1和ERG12为限速酶。最终，构建的工程菌株在24孔板和5 L发酵罐中分别实现了1.66 g/L和6.27 g/L的香叶醇产量，创造了微生物细胞工厂合成香叶醇的最高记录。