利用CRISPR/cas13a的三重级联扩增系统实现肿瘤诊断中FEN1活性的超灵敏检测

本文介绍了一种基于CRISPR/Cas13a的三重级联扩增系统，用于超灵敏检测肿瘤诊断中的FEN1活性。传统的FEN1检测方法存在耗时和灵敏度低的问题，而新开发的LTACas13a系统通过结合FEN1特异性识别、T4 DNA连接酶诱导的连接和T7 RNA聚合辅助转录，利用CRISPR/Cas13a的反式切割活性放大信号，实现了高灵敏度和高选择性的检测。该系统设计了一个三边分叉DNA哑铃探针，简化了实验过程并减少了背景信号。实验结果表明，该系统对FEN1的检测限为0.0012 U/ml，且不受其他核酸酶的干扰，性能与酶联免疫吸附反应相媲美。该生物传感器不仅适用于FEN1的检测，还可用于检测其他DNA糖基化酶，为早期癌症检测提供了有效的诊断工具。