PAM非依赖性的CRISPR-Cas12a系统用于单核苷酸突变的特异性检测

本文探讨了单核苷酸突变（SNV）检测的重要性及其在临床和生物学研究中的应用。由于CRISPR/Cas12a系统在检测SNV时依赖原间隔序列（PAM），而SNV突变区附近的PAM位点较少，导致检测灵敏度降低。为解决这一问题，作者开发了一种名为TRACER的PAM非依赖性SNV检测方法。该方法通过将双链DNA（dsDNA）转变为单链DNA（ssDNA），使CRISPR/Cas12a系统能够靶向识别ssDNA而不依赖PAM序列，从而激活反式切割活性并产生荧光信号。实验结果表明，TRACER具有高灵敏度和特异性，能够检测低至0.1%的突变型基因混合物，并在临床样本检测中表现出与Sanger测序相当的准确性。TRACER方法的开发为SNV检测提供了新的视角，扩展了CRISPR/Cas12a系统的应用范围，具有重要的临床和科研价值。