细胞固定提升原位交联质谱性能并保留细胞超微结构

本文针对传统原位交联质谱(XL-MS)技术存在的细胞结构破坏和采样深度有限问题，提出通过甲醛预固定细胞的新策略。研究背景显示蛋白质相互作用(PPI)图谱对理解细胞功能至关重要，但传统交联剂膜通透性差导致反应期间细胞结构发生变化。研究目的旨在验证预固定策略能否在保护细胞超微结构的同时提升XL-MS性能。实验结果表明：1）4%甲醛固定可有效维持肌动蛋白骨架完整性，将结构破坏率从70%降至10%以下；2）固定后通透处理使DSS交联检测量提升3-4倍，PPI数量从136增至399；3）该策略成功应用于膜不通透的PhoX交联剂，鉴定出915个高质量PPIs。结论证实预固定策略能拓展交联剂选择范围、提高数据质量，使原位XL-MS成为相互作用组分析的有效替代方案。