通过靶标DNA或RNA的结合激活Cas9的反式核酸酶活性

本文主要研究了Cas9蛋白的反式切割活性及其在核酸检测中的应用。背景介绍了CRISPR-Cas9系统的工作原理和Cas9蛋白的特性，指出Cas9具有由靶标DNA或RNA激活的反式切割活性，但此前未被系统报道。研究目的在于探索Cas9的反式切割活性及其对不同类型核酸的切割能力。通过实验，作者发现Cas9在与sgRNA结合后，其反式切割活性得到激活，尤其是在切割含有poly T或poly C的单链DNA时表现出较强的活性。此外，Cas9-crRNA-tracrRNA系统对特定序列的切割活性更强，且切割底物的二级结构也会影响其活性。基于这些发现，作者开发了两种核酸检测方法DACD和RACD，这些方法能够高特异性和高灵敏度地检测DNA和RNA，包括猴痘病毒和呼吸道合胞病毒等。结论指出，Cas9的反式切割活性为其在核酸检测领域的应用提供了新的可能性，推动了CRISPR技术在分子生物学领域的进一步发展。